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启衡星高灵敏探针法qPCR Mix篇之:非洲猪瘟(ASF) 检测解决方案

启衡星 StarLighter HS Probe qPCR Mix (Universal)是基于经热启动基因工程改造的 Taq Pro DNA 聚合酶研发的即用型高灵敏探针法 qPCR Mix,其优化的缓冲液体系能降低非特异性扩增、提升扩增效率,适用于超高灵敏 qPCR 检测,且通过动物单细胞胚胎性别检测验证,可高效扩增低至 fg 级模板 DNA。该产品聚合酶用抗体封闭,90℃以上 30s 激活酶活性,DNA 聚合酶具 5’→3'合成 DNA 及 5’→3’外切酶活性,无 3’→5’校正外切酶活性,扩增 1kb 产物仅需 1-10s,兼容不同 qPCR 仪器的标准和快速模式。在非洲猪瘟 qPCR 检测应用案例中,以非洲猪瘟病毒基因组保守区及猪基因组特定区域设计特异性引物和探针,使用该 qPCR Mix 可快速定性检测样品中病毒 DNA,且检测灵敏度高,可实现单拷贝 / 反应的检测,与供应商 B 产品相比,在实测样本中检出性能更优。
May 12th,2022 534 浏览量

启衡星高灵敏探针法qPCR Mix

Starlighter HS Probe qPCR Mix(Universal) 是基于超高性能热启动基因工程改造Taq Pro DNA聚合酶研发的即用型高灵敏探针法qPCR Mix。优化的缓冲液反应体系可有效降低非特异性扩增,大大增加qPCR的扩增效率,适用于超高灵敏的qPCR检测。该产品已通过动物单细胞胚胎性别检测进行验证,可高效扩增低至fg级模板的DNA。该qPCR Mix中的聚合酶使用抗体进行封闭,90℃ 以上30 s可激活酶活性。该产品中的DNA聚合酶催化5’→3'方向合成DNA,有5’ →3’ 外切酶活性,无 3’→5’ 校正外切酶活性。在扩增产物具有3’dA突出末端时,扩增1kb仅需1-l0 s。可兼容不同 qPCR仪器的标准及快速模式。由于该试剂具有超高的检测灵敏性以及抗抑制剂扩增,使其更适用于动物疫病及环境检测等方面的应用。

应用案例——非洲猪瘟 qPCR 检测

非洲猪瘟(African swine fever virus, ASF)是由非洲猪瘟病毒(African Swine fever virus,ASFV)感染引起的一种急性、出血性、烈性传染病。其特征是发病过程短,急性感染死亡率高达100%。世界动物卫生组织(OIE)将其列为法定报告动物疫病,并列入《禁止生物武器公约》核查动物病原体清单,我国将其列为一类动物疫情。

通过对非洲猪瘟病毒基因组的保守区为靶标设计特异性引物及探针,探针标记FAM荧光素;同时以猪基因组的某一段区域为阳性内参设计特异性引物及探针,探针标记VIC荧光素。使用启衡星StarLighter高灵敏探针法 qPCR 预混液(通用型,货号:FS-Q3002),qPCR仪,可对样品中的非洲猪瘟病毒DNA进行快速定性检测。兼容不同仪器机型和升降温速率。

以非洲猪瘟病毒基因制备符合一级物质标准的质粒标准品,原始浓度为10^ 5拷贝/μL进行梯度稀释,最终浓度为1.2-240000拷贝/反应(理论计算值)。实验结果显示,在10 μL的反应体系中,可实现单拷贝/反应的检测灵敏度。以病毒质粒做标准曲线,扩增效率及R2 值均表现优异。

与供应商B产品相比,在所有的实测样本中,启衡星表现出更优的检出性能。

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