2020-06-29
多重PCR技术虽原理与常规PCR相同,但操作中易遇问题,需优化以获更好扩增效果。引物设计需满足一般原则,还要注意各引物间不能互补尤其是3’端,避免形成二聚体,与其它扩增片段和模板互补性要小,扩增片段间同源性不能大,引物长度、(G+C)含量、Tm值要尽可能一致,各引物扩增产物片段大小要有差别以便电泳区分。反应体系是扩增效果的重要因素,各组分需满足每对引物对应的靶点扩增量要求。反应条件选择应有利于较大片段扩增,因多重PCR反应中多对引物扩增效率和速度不同,且遵循较小片段优先扩增原则。常见问题有引物二聚体、非特异性扩增及扩增产物条带弱等,可通过选择合适反应体系和条件进行优化调整,以提高多重PCR的扩增效果。