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qPCR引物设计遵循PCR基本规律，因定量方式不同而有所区别。SYBR染料法引物设计需注意引物长度、G+C含量、3'端碱基选择、避免二聚体和发夹结构、Tm值匹配、ΔG值控制、5'端修饰、产物长度及跨越内含子等要点。TaqMan探针法除包含上述原则外，还需注意5'端避免G碱基、探针退火温度高于引物、无连续相同碱基、探针位置靠近上游引物及C碱基多于G碱基等。对于RNA样本定量，还需考虑引物特异性、可变剪切、扩增效率、引物生产工艺及跨内含子设计，以确保准确检测。引物设计软件如Primer Premier、Oligo7等，及在线工具如Primer-blast、Primer3 Plus等，可辅助设计。设计流程包括在NCBI检索目的基因、设定参数、获取引物对并验证唯一性，最后进行PCR验证，确保产物特异性。启衡星StarLighter SYBR Green qPCR Mix优化配方，有助于解决非特异性扩增问题，简化引物设计及验证流程，节省时间和成本。

PCR（聚合酶链式反应）自1985年问世以来，对生命科学产生了深远影响，广泛应用于医疗诊断、法医检测等领域。PCR通过变性、退火和延伸三个步骤，利用引物和耐热DNA聚合酶实现DNA的高效扩增。常规PCR反应包括DNA模板、引物、DNA聚合酶、dNTP和含镁离子的缓冲体系，现代PCR试剂通常将除引物和模板外的试剂预配置成Mix，简化实验操作。PCR技术的发展历程中，关键人物和事件包括沃森和克里克提出DNA双螺旋结构、Kornberg发现DNA聚合酶、Mullis发明PCR等。随着技术进步，PCR衍生出多种类型，如qPCR（定量PCR），通过荧光信号实时监测DNA扩增过程，实现精确定量分析。qPCR常用的方法有SYBR染料法、TaqMan探针法和分子信标法，各有优缺点和适用场景。

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如何选择一款好的探针法qPCR Mix？