StarPure组织&细胞总RNA提取试剂盒

• 无需有毒的苯酚/氯仿、β-巯基乙醇等试剂，也无需进行乙醇沉淀等步骤；
• DNA remove & RNA吸附柱可以1分钟过滤清除gDNA，不需要繁琐的DNase消化，最快全程仅需6分钟。最大限度的简化了操作和减少了RNA降解几率；
• RNA完整性极好不降解，电泳图28S:18 S典型比值大于2 : 1；
• 提取的RNA纯度极高，无蛋白和杂质残留，OD260/OD 280典型的比值高达1～2.2；一般不需要DNase消化，可直接用于反转录PCR、荧光定量PCR、高通量测序建库等实验；
• 通用性强，普通动物组织和细胞样本均可使用。

得到的总 RNA 纯度高，gDNA 残留少，无蛋白和其他杂质污染，可直接用于RT-PCR、RT-qPCR、RNA高通量测序建库、芯片分析等多种下游实验。

产品组分



实验步骤

一、样本处理

A．贴壁细胞：无需消化，吸除细胞培养基上清后可直接在培养皿中立即加入500 μL Lysis Buffer消化裂解（可用移液器反复吹打帮助裂解）；不方便直接裂解的培养容器，可以用细胞刮子刮下细胞，或者胰酶消化后离心收集细胞，加入500 μL Lysis Buffer（< 8 × 10⁶个细胞），涡旋震荡或移液器吹打直至无明显细胞团即可。

B．悬浮细胞：直接离心收集细胞，13,000 rpm离心10秒，吸除上清后加入 500 μL Lysis Buffer（< 8 × 10⁶个细胞），涡旋震荡或移液器吹打直至无明显细胞团即可。

C．动物组织：取新鲜组织约10 - 20 mg（< 30 mg）加入 500 μL Lysis Buffer，用玻璃匀浆器或电动匀浆器将组织研磨均匀。若用液氮研磨，在液氮中研磨组织成粉末后，取适量组织细粉10-20 mg（< 30 mg）转移至预装有500 μL Lysis Buffer的1.5 mL 离心管，涡旋震荡或移液器吹打直至无明显细胞团即可。

二、RNA提取

1.将处理好的匀浆液加到DNA remove & RNA吸附柱上（柱子放在2 mL 收集管内），13,000 rpm离心1分钟，收集管中的滤液（RNA在滤液中）。

2.向滤液中加入0.5倍滤液体积的无水乙醇（约250 μL），移液器吹打混匀。

✮注: 若加乙醇后出现浑浊或有絮状物产生，属正常现象，立即吹打混匀，不要离心。

3.立即将上述混合液加入到一个新的DNA remove & RNA吸附柱内（已放入收集管中），静置1 min，13,000 rpm离心30秒，弃滤液，将吸附柱放回收集管。

✮注: 吸附柱容积为750 μL，若混合液超过该体积请分多次进行上柱。

4.向柱子中加入700 μL Protein Wash Buffer，室温放置30 秒，13,000 rpm离心30 秒，弃滤液。

5.向吸附柱中加入500 μL Wash Buffer（使用前请检查是否已加入无水乙醇），13,000 rpm离心30 秒，弃滤液。

6.重复步骤5一遍。

7.将吸附柱放回空收集管中，13,000 rpm空甩离心2 min。尽量除去Wash Buffer，以免Wash Buffer中残留乙醇抑制下游反应。

8.将吸附柱转移至新的1.5 mL离心管中，向吸附柱膜中央悬空滴加30-50 μL的RNase-free ddH₂O，静置1 min，13,000 rpm离心1 min。

✮注: 洗脱体积建议不少于30 μL，体积过小会影响核酸回收效率。以下步骤都可以帮助提高RNA产物浓度：

• RNase-free ddH₂O于90℃预热；
• 将第一次洗脱液重新加入吸附柱进行二次洗脱。